İnhibitörler

Yapı tanımlanmalı ve sentezi tekrarlanabilir olmalıdır. Yaygın toksik kısımlardan kaçının ve -karışan kısımları (PAINS) tavada test edin. Benzer şekilde, kovalent ekleme stabilite simgesi gibi gerekli olmadıkça kimyasal olarak reaktif gruplardan kaçının. Stabilite (saflık ve kimyasal kimlik), herhangi bir pH hassasiyetine dikkat edilerek ilgili ortamda korunmalıdır. Etkinlik kültür ortamında kalmalıdır. Molekül spesifik olmayan- kimyasal reaktivite (örn. redoks reaksiyonları veya membran kararsızlaşması) sergilememelidir.

IC50 ve Ki, inhibitör gücünü göstermenin en yaygın yoludur. Enzim inhibisyonu bağlamında IC50, verilen deneysel koşullar altında bir enzimatik reaksiyonun hızını %50 azaltmak için gereken inhibitör konsantrasyonunu belirtir. Ki, inhibitörün enzime bağlanması için inhibitör-hedef kompleksi parçalanmasının (koff), inhibitör-hedef kompleksi oluşumuna (kon) oranını belirtir. Ki terimi bir termodinamik denge sabitidir ve dolayısıyla sabit bir değerdir. Öte yandan IC50, tanımlanmış bir dizi koşullar altında inhibisyonun bir temsilidir ve reaksiyon ortamında mevcut substrat konsantrasyonu gibi faktörlere bağlı olarak değişecektir. Rekabetçi inhibitörler durumunda IC50, Cheng-Prusoff denklemi yoluyla Ki ile ilişkilendirilebilir: IC50=Ki*(1+[S]0/Km). Bu, farklı inhibitör bağlama modellerini kullanarak IC50 değerlerini Ki değerlerine dönüştürmek için{17}}kullanışlı bir web tabanlı araçtır.

Profiling will define the selectivity for related targets, which is often a more critical factor than potency. Typically, in biochemical assays, a factor of >Hedefin diğer aile üyelerine karşı 10-100-kat potansiyeli, bir inhibitörün o hedef için seçici olduğunu tanımlar. İlgilendiğiniz hedef için seçici olacak şekilde tasarlanan inhibitörler yine de diğer proteinlere daha yüksek konsantrasyonlarda bağlanabilir. Belirli bir kimyasal sınıfla ilişkili herhangi bir ek aktivitenin farkında olmak önemlidir. Negatif kontrol deneyleri, inhibitörün, istenen hedefi inhibe etmek için kullanılan konsantrasyonda herhangi bir hedef dışı proteinin fonksiyonunu etkili bir şekilde değiştirmediğini gösterecek şekilde tasarlanabilir. Hücrelerin veya proteinlerin yalnızca solvente maruz bırakılması veya R/S stereoizomerleri gibi yakından ilişkili inaktif yapısal analogların ikame edilmesi gibi iyi düşünülmüş negatif kontroller, inhibitörün etkisinin doğrulanmasına yardımcı olur.

Etki mekanizması, fizyolojik konsantrasyonlardaki doğal substratların inhibitör etkinliğini nasıl modüle edeceğini belirlemek ve bu mekanizmayla ilişkili herhangi bir hassasiyeti belirlemek amacıyla inhibitörün doğasını daha fazla tanımlamak için önemlidir. Potansiyel inhibisyon olayları şunları içerir: İnhibitör, enzimi genellikle kovalent bağlanma yoluyla bağlar ve bu da onu geri dönülemez şekilde etkisiz hale getirir. Geri dönüşü olmayan inhibitörler tipik olarak kovalent olmasına rağmen,-kovalent olmayan inhibitörler bazen o kadar uzun ömürlü olabilir ki, geri dönüşü olmayan inhibitörler gibi davranabilirler.